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Dazu wird 1 cm über dem unteren Rand der DC Platte unter Zuhilfenahme eines Geodreiecks ein gerader Strich mit einem weichen Bleistift gezeichnet. Auf dieser Hilfslinie werden dann mittels Mikroliterpipette 3x 5 µl Blattextrakt aufgetragen. Zwischen den Intervallen muss die Platte kurz trocknen, ansonsten breiten sich die Substanzflecken zu weit aus. Das Ziel ist, Substanzflecken in der Größe von 2-3 mm zu haben, um eine optimale Trennung zu gewährleisten. Es funktioniert sehr gut, mehrere Substanzflecken aneinander zu setzen, so dass die Auftragungszone entlang der Hilfslinie größer wird. Die Kieselgel-Schicht darf während des Auftragens nicht beschädigt werden. Die betüpfelte DC Platte wird aufrecht in die Entwicklungskammer gestellt. Dünnschichtchromatographie blattfarbstoffe rf wert 6. Durch Kapillarkräfte steigt das Laufmittel entlang der Platte nach oben. Ist die Laufmittelfront nach 5-10 min ca. 1 cm vom oberen Rand entfernt, wird die DC-Platte mit einer Pinzette aus der Kammer genommen und die Laufmittelfront eingezeichnet, um später den Rf-Wert zu berechnen.
Manche Farbstoffe werden vom Kieselgel stärker zurückgehalten, andere schwächer. Das führt zu einem Trenneffekt und das zuvor homogene Gemisch kann in seien Bestandteile zerlegt und analysiert werden. UV/VIS-Spektroskopie: Im UV/VIS-Spektrometer wird Licht mit definierter Wellenlänge auf die Probe gestrahlt und mit einem Detektor gemessen, wie viel davon absorbiert wird. So absorbieren Chlorophyll A und B blaues und rotes Licht, reflektieren aber grünes Licht (weshalb wir Pflanzen als "grün" wahrnehmen). Aber wie die Dünnschichtchromatographie gezeigt hat, besteht der Blattextrakt nicht nur aus grünem Chlorophyll – auch im UV/VIS-Spektrum kann das Absorbtionsmaximum von beta-Carotin bei 475 nm identifiziert werden. Dünnschichtchromatographie · Prinzip & Auswertung · [mit Video]. Antwort auf die Eingangsfrage: Warum verfärben sich die Blätter im Herbst? Würde man ein Blatt aus dem Sommer und eines aus dem Herbst vergleichen, würde man sehen, dass die Rf-Werte gleichbleiben – also dieselben Substanzen im Blatt vorkommen. Was sich ändert, ist die Zusammensetzung.
Dafür misst man auf dem Chromatogramm jeweils wie weit sich die einzelnen Bestandteile der Probe von der Startlinie weg bewegt haben. Diese Längen setzt man dann jeweils ins Verhältnis zu der Wegstrecke, die das Laufmittel von der Startlinie aus zurückgelegt hat. Dadurch ergibt sich der jeweilige -Faktor: = Laufstrecke Substanz; = Laufstrecke Laufmittel Durch diesen -Wert, auch Retentionsfaktor genannt, stellt man Vergleichbarkeit zwischen den Ergebnissen verschiedener Dünnschichtchromatogrammen her, da dieser Wert bei gleicher Wahl der Zusammensetzung der mobilen Phase und der stationären Phase eine für jeden Stoff spezifische Konstante ist. Über diesen -Wert kann man die einzelnen Bestandteile durch Vergleiche mit einer Referenz auch identifizieren. Dünnschichtchromatographie blattfarbstoffe rf wert 2. Dünnschichtchromatographie Rst-Faktor Oftmals wird für eine exaktere Bestimmung auch der -Wert statt dem -Wert herangezogen. Dieser setzt die Laufstrecke der Substanzen der Proben ins Verhältnis zur Laufstrecke, die das reine Laufmittel ohne Probe gehabt hätte.
Anschlieend wird die Rohchlorophylllsung mit einer Kapillare strichfrmig etwa 2cm vom unteren Rand entfernt, auf eine DC-Kieselgelplatte aufgetragen. Dieser Vorgang wird mehrmals wiederholt (Zwischentrocknung! ). Zuletzt wird das DC in die mit dem Laufmittel befllte Trennkammer gestellt. Dünnschichtchromatographie - Blattfarbstoffe / Metallchelate - GRIN. Nach ca. 10min, sofern die Laufmittelfront bis kurz vor den oberen Rand der DC-Platte gelaufen ist, wird die Platte aus der Trennkammer heraus genommen und markiert sofort die Laufmittelfront und lsst die Platten endgltig trocknen. Beobachtung: Das Laufmittel steigt die mit Kieselgel beschichtete DC-Platte hoch und nimmt die verschiedenen Farbstoffe unterschiedlich weit mit. Es bilden sich braune, gelbe, hell- sowie dunkelgrne strichfrmige Farbfronten. Man kann beobachten dass die vorher einfarbige Substanz sich nun in mehrfarbige Komponenten aufgeteilt hat. Ich vermute dass die einzelnen Farbstoffe unterschiedlich weit vom Laufmittel getragen wurden. Erklrung: Das Laufmittel, bestehend aus Benzin, Petrolther und Propanol-2 steigt auf Grund der Kapillarwirkung die mit Kieselgel beschichtete DC-Platte hoch und zieht die im Laufmittel unterschiedlich gut gelsten Bestandteile unterschiedlich weit mit.
Die luftgetrocknete DC-Platte kann nun unter kurzwelligem (254 nm) und langwelligem (366 nm) UV-Licht betrachtet werden. Auf der DC-Platte befindet sich ein Fluoreszenzindikator, der unter kurzwelligem UV-Licht grün fluoresziert. Durch Fluoreszenzlöschung erscheinen Substanzflecken dunkel. Unter langwelligem UV-Licht besitzen manche Farbstoffe selbst eine Fluoreszenz. Auch die Betrachtung unter sichtbarem Licht eignet sich bei farbigen Substanzen. Der Rf-Wert wird nach folgender Formel berechnet: Rf = Laufstrecke Substanz / Abstand Auftragunglinie zur Laufmittelfront UV/VIS-Spektroskopie: Die Probenlösung wird mit einer Pasteurpipette in eine Küvette aus Polystyrol überführt und im UV/VIS-Spektrometer gemessen. Dünnschichtchromatographie blattfarbstoffe rf wert online. Entsorgung Alle Lösungsmittel kommen in den Behälter für organische, halogenfreie Abfälle. Erklärung Dünnschichtchromatographie: Die mobile Phase – das Laufmittel - schleppt alle Farbstoffe mit. Diese haben aber aufgrund ihres unterschiedlichen Aufbaus unterschiedlich starke Wechselwirkungen mit der stationären Phase – dem Kieselgel.
Nach Absprache auch darüber hinaus.
Es entsteht eine neue Offenheit, die für mehr Transparenz und maximale Lichtdurchlässigkeit sorgt.
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