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Die nachstehend beschriebenen Prüfungen ermöglichen das quantitative Auszählen mesophiler Bakterien und Pilze, die unter aeroben Bedingungen wachsen. Die Prüfungen sind dazu bestimmt, insbesondere festzustellen, ob ein in einer Arzneibuchmonographie beschriebenes Produkt den mikrobiologischen Anforderungen der betreffenden Monographie entspricht. Die Bestimmung der gesamten vermehrungsfähigen Keime wird unter Bedingungen durchgeführt, die eine versehentliche Kontamination des zu prüfenden Produkts während der Prüfung vermeiden. Der Nachweis spezifizierter Mikroorganismen wird mit selektiven Nährmedien durchgeführt. Die Prüfung auf Bakterien-Endotoxine dient dem Nachweis oder der Bestimmung von Endotoxinen gramnegativer Bakterien mit Hilfe des Amöbozyten-Lysats von Pfeilschwanzkrebsen (Limulus polyphemus oder Tachypleus tridentatus). Für diese Prüfung haben die CUP Laboratorien drei Techniken im Angebot: die Gelbildungstechnik die turbidimetrische Technik und die Technik mit Chromogen, die auf der Bildung eines Gels, der Entwicklung einer Trübung nach Spaltung eines endogenen Substrats beziehungsweise einer Farbentwicklung nach Spaltung eines synthetischen Peptid-Chromogen-Komplexes beruhen.
Endotoxine sind Lipopolysaccharide (LPS), d. h. Verbindungen aus fettähnlichen (Lipo-) Bestandteilen und Zucker-Bestandteilen (Polysacchariden). Beim Zerfall der Bakterien werden Teile davon frei und wirken toxisch. Diese Teile werden als Endotoxine bezeichnet und von lebenden Bakterien im Gegensatz zu anderen Toxinen nicht kontinuierlich in deren Umgebung abgegeben. Sie sind sehr hitzestabil und überstehen auch die gängigen Sterilisationsprozesse, d. auch sterilisierte Produkte können eine hohe Endotoxinbelastung aufweisen, wenn sie vor der Sterilisation stark mit Bakterien belastet waren. Diese Bakterien werden im Prozess abgetötet, womit die Endotoxine der Zellmembran freigesetzt werden. Die empfindlichste Methode der Endotoxinmessung beruht auf der Verwendung des Lysats eines bestimmten Zelltyps namens Amöbozyt aus dem Blut des Pfeilschwanz-krebses (Limulus). Daraus folgt auch die häufig verwendete Bezeichnung LAL-Test (Limulus-Amöbozyten-Lysat-Test) für die Prüfung auf Endotoxine.
Gerne helfen wir Ihnen bei Ihren individuellen Fragestellungen und unterstützen Sie beratend bei der Sanierung. Das MIKROBIOLOGISCHE LABOR bietet Ihnen zum Beispiel folgende Leistungen im Bereich der Endotoxinbestimmung Endotoxine im Wasser Endotoxine in der Luft (am Arbeitsplatz oder in Emissions-/Immissionsproben) Endotoxine im Dialysewasser Endotoxine in wässrigen Extrakten (z. Zuckerproben) Eine Störung des Endotoxintests ist durch die extreme Sensibilität des eingesetzten Lysats sehr schnell gegeben. So können die in der Nachweis-Kaskade ablaufenden Enzym-Reaktionen durch kleine Veränderungen in der Probenzusammensetzung weitreichend gestört werden. Beispiele für störende Substanzen oder Gegebenheiten sind in der Probe enthaltene ß-Glucane, extreme pH-Werte durch Säuren oder Basen, Desinfektionsmittel wie Peroxide oder eine starke Trübung oder Färbung der zu messenden Probe. Mögliche Tests zur Bestimmung des Endotoxingehalts: LAL-Test (Limulus-Amoebozyten-Lysat-Test): Je nach Sensitivitätsbereich wird mit turbidimetrischer (0, 005 bis 1 EU/ml) oder chromogenkinetischer Methode (0, 005 bis 50 EU/ml) im Microplate Reader gemessen.
LAL-Test). Modernere Methoden verzichten inzwischen auf den Einsatz tierischer Komponenten und nutzen für die Endotoxinbestimmung rekombinant hergestellte Proteine, die fähig sind an die Endotoxine zu binden und gleichzeitig in der Lage sind durch Umsetzung eines Substrates ein Fluoreszenzsignal zu generieren. Zerstörung von Endotoxinen [ Bearbeiten | Quelltext bearbeiten] Hitzebeständige Geräte werden 5 Stunden bei 200 °C gelagert, um sie von Endotoxinen zu befreien. Nicht hitzebeständige Geräte werden mit 1-molarer Natronlauge behandelt, die 15 Stunden lang einwirken soll. Weblinks [ Bearbeiten | Quelltext bearbeiten] Institut für Prävention und Arbeitsmedizin der Deutschen Gesetzlichen Unfallversicherung - Institut der Ruhr-Universität Bochum (IPA): Endotoxine – Wirkung und Nachweisverfahren. - BGFA-Info 01/2003, Auf: ( Memento vom 11. Oktober 2013 im Internet Archive) G. Linsel, A. Kolk: Verfahren zur Bestimmung der Endotoxinkonzentration in der Luft am Arbeitsplatz. Auf:; zuletzt abgerufen am 19. Januar 2021.
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